王虎 任路路 任莹 许广华 司永 李小伟
安徽省太和县中医院，安徽太和236607
【摘要】目的：建立三拗鱼龙合剂中橙皮苷的含量测定方法。方法：采用HPLC法测定，色谱柱为碳十八烷基硅烷键合硅胶柱；流动相为乙腈-0 4%磷酸水溶液（20∶80）；检测波长：283nm；流速：1 0ml/min；柱温：30℃。结果：橙皮苷在13 91～222 6μg/ml范围呈良好的线性关系，平均回收率100 11%，RSD=1 37%（n=6）。结论：该方法简单、准确，重复性、稳定性良好，精密度高，结果可靠，可作为三拗鱼龙合剂质量控制的方法。
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关键词 三拗鱼龙合剂；橙皮苷；HPLC
【中图分类号】R284 1【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517(2015)01-0044-02
三拗鱼龙合剂由鱼腥草、浙贝母、陈皮等药味组成，为太和县中医院医院制剂。具有宣肺平喘、止咳消痰的功效，用于急、慢性支气管炎。作为医院制剂，原标准中无含量测定项。为了更好的控制医院制剂的质量，使本制剂疗效稳定可控，本文采用高效液相色谱法测定陈皮中橙皮苷的含量，该法灵敏度高，专属性好，操作简单，重复性好，可作为三拗鱼龙合剂质量控制的方法。
1仪器与材料
1 1仪器安捷伦LC-1220型高效液相色谱仪；紫外检测器；101-1A型数显恒温干燥箱（上海光地仪器设备有限公司）；AL-120型电子天平（瑞士梅特勒-托利多仪器公司）；HS-180型超声波清洗机（宁波海曙金兰教仪科研究所）。
1 2试药三拗鱼龙合剂（批号：20140417、20140712、20140906，太和中医院中药制剂室）；橙皮苷对照品（批号：110721-201316，中国药品生物制品检定所）；乙腈为色谱纯；水为纯化水；其余试剂均为分析纯。
2方法与结果
2 1色谱条件色谱柱：依利特Hypersil ODS（4 6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈-0 4%磷酸水溶液（20∶80）；检测波长：283nm；流速：1 0ml/min；柱温：30℃；进样量：20μl。理论塔板数以橙皮苷计应不低于4000，分离度大于1 5。
2 2对照品溶液的制备精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇-0 4%磷酸水溶液（1∶1）制成每1ml含50μg的溶液。
2 3供试品溶液的制备［1］密量取本品5ml，置25ml量瓶中，加甲醇20ml，超声处理（功率100W，频率40kHz）20min，放冷，用甲醇定容，摇匀，离心（3000r/min，10min），精密移取上清液5ml置10ml量瓶中，用0 4%磷酸稀释至刻度，摇匀，过0 45μm滤膜，即得。
2 4干扰试验按处方比例及生产工艺制备不含陈皮的三拗鱼龙合剂，再按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液按上述色谱条件测定，记录色谱图。结果表明，阴性对照溶液在与橙皮苷对照品相同保留时间处未显色谱峰，故认为无干扰。见图1。
2 5线性关系考察精密称取橙皮苷对照品11 13mg，置25ml量瓶中，用甲醇定容，作为储备液。精密移取储备液5ml，置10ml量瓶中，用甲醇-0 4%磷酸溶液（1∶1）稀释至刻度，摇匀，作为2号对照品溶液；同法制成3、4、5号对照品溶液。分别精密吸取各对照品溶液20μl，按上述色谱条件进样。以对照品的进样量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），得回归方程：Y＝1 945×10-9X-0 002225532，R＝0 9996。结果表明，橙皮苷在13 91～222 6μg/ml范围内线性关系良好。
2 6精密度试验取“2 5”项下3号对照品溶液，按上述色谱条件连续进样6次，测定峰面积。结果橙皮苷峰面积RSD为0 92%。 结果表明仪器精密度良好。
2 7重复性试验取同一批号（20140417）样品6份，分别按“2 3”项下方法制备供试品溶液，并按上述色谱条件进样测定其含量。结果橙皮苷平均含量为0 4856mg/ml，RSD为1 34%，结果表明方法重复性良好。
2 8稳定性试验取同一批号（20140417）供试品溶液，室温下放置，按上述色谱条件，分别于配制后0、2、4、6、8、12、24 h 进样测定，记录橙皮苷峰面积。结果峰面积RSD为1 76%。结果表明供试品溶液在24h内基本稳定。
2 9加样回收率试验［2-3］取已知含量的同一批号（20140417）样品6份，分别精密加入浓度为0 4452mg/ml橙皮苷对照品溶液 1 0 ml，按“2 3”项下的制备方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定其含量，计算回收率。结果见表1。
2 10样品含量测定取样品3批，按所述方法测定，以外标法计算含量。结果见表2。
3结果与讨论
3 1流动相的选择HPLC法测定橙皮苷含量的文献［4-7］较多，常采用甲醇-水系统和乙腈-水系统。由于峰形较差，常会在流动相中添加一定比例酸改善峰形。试验考察了甲醇-0 4%醋酸水溶液（35∶65）、甲醇-0 4%磷酸水溶液（20∶80）、乙腈-0 4%磷酸水溶液（20∶80）等流动相，发现乙腈-0 4%磷酸水溶液（20∶80）峰形较为满意，且保留时间适宜、分离度良好，故选择此条件作为测定条件。
3 2样品处理分别对样品超声10、15、20、25min后进样考察，结果显示超声20min含量高于15min，而超声25min被测组分含量几乎不再增加，故确定超声时间20min即可。由于定容后样品过滤较困难，试验时间长，故选择离心法除去杂质。且离心后与直接过滤样品的色谱峰面积相比较，无明显差异。样品用甲醇处理后直接进样，色谱峰前沿明显，分离度差。用0 4%磷酸稀释后进样，峰形较为满意。故样品处理后，故加入适量磷酸以调整峰形。
采用HPLC法测定三拗鱼龙合剂的含量，操作简便，结果准确可靠，重现性好，可用于该品种的质量控制和稳定性考察，为三拗鱼龙合剂质量标准的建立提供依据。
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参考文献
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(收稿日期：2014 10 12)