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渝产续断多糖超声波辅助提取工艺的优化

  • 投稿布衣
  • 更新时间2015-09-22
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张 丹1,陶燕铎2,谈利红1,余 保1,颜学伟1,曹纬国1

(1.重庆医科大学中医药学院,重庆 400016;2.中国科学院西北高原生物研究所,西宁 810000)

摘要: 为建立渝产续断(Dipsacus asperoids)多糖的最佳超声波辅助提取工艺,设计正交试验,以续断多糖的提取率为评价指标,对续断多糖的超声波辅助提取工艺参数进行考察。结果表明,最佳超声波辅助提取工艺为料液比1∶20(g∶mL),提取时间60 min,提取4次,测得续断多糖的平均提取率为7.472%,RSD为2.12%,表明续断多糖超声波辅助提取工艺稳定,质量可控。

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关键词 : 续断(Dipsacus asperoids);多糖;正交试验;超声波辅助

中图分类号:S567.23+9;R284.2 文献标识码:A 文章编号:0439-8114(2015)02-0431-03

DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.02.044

续断为川续断科植物川续断(Dipsacus asperoids)的干燥根[1],又名川断,具有补肝肾、强筋骨、续折伤、止崩漏、安胎等功效,主要用于胎漏、胎动不安、滑胎、腰膝酸软、跌打损伤和骨折等症。续断化学成分研究已较为深入,且多集中于其皂苷类成分[2,3],已有研究表明续断类药材多糖含量较高,重庆作为续断的主产区之一,目前尚未有关于重庆产续断多糖的研究报道。多糖尤其是中药多糖具有增强机体免疫功能及抗肿瘤等药理作用,因此续断药材中含量较高的多糖类成分具有潜在的研究价值。本试验以重庆产续断为原料,采用正交试验法优选续断多糖的超声波辅助提取工艺,为续断多糖的深入研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

续断药材采自重庆武隆后坪乡,经重庆医科大学王刚副教授鉴定为川续断。

UV-1750型紫外可见分光光度计(岛津仪器有限公司);HH-6型数显恒温水浴锅(金坛市荣华仪器制造有限公司);AL204型电子分析天平(瑞士梅特勒托利多集团);KH5200DA型数控超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司),DGG-9240A型电热恒温鼓风干燥箱(上海森信实验仪器有限公司)。

葡萄糖标准品(中国药品生物制品检定研究院提供,批号为110833),浓硫酸、正丁醇、氯仿、丙酮、无水乙醇、95%乙醇、石油醚、纯净水等均为分析纯。

1.2 试验方法

1.2.1 标准品溶液的配制 室温下精密称取干燥至恒重的葡萄糖标准品51.8 mg,置50 mL容量瓶中,加水溶解并定容至刻度,摇匀即得。

1.2.2 供试品溶液的制备 称取已烘干的续断药材粉末10 g,置圆底烧瓶中加入80 mL石油醚回流提取脱脂,共计2次,每次2 h。药渣挥去溶剂后,加入80 mL 95%乙醇回流提取2次,每次1.5 h,药渣挥去溶剂后,加水200 mL,100 ℃水浴提取5次,每次2 h,合并提取液,浓缩并定容至1 000 mL,即得供试品溶液。

1.2.3 标准曲线的制备 吸取上述标准品溶液0、0.5、1.0、2.0、4.0、5.0 mL于50 mL容量瓶中,加去离子水稀释至刻度,得系列葡萄糖标准品溶液。各吸取0.5 mL置于10 mL具塞试管中,再分别加入5%苯酚1.0 mL,摇匀后迅速加入浓硫酸4.0 mL,摇匀后30 ℃水浴30 min,冰水浴冷却15 min,在489 nm下测定其吸光度,以吸光度A为纵坐标,葡萄糖标准品浓度C为横坐标制作标准曲线[4,5]。

1.2.4 正交试验设计[6,7] 选定影响多糖提取率的料液比(g∶mL,下同)、提取时间以及提取次数作为考察因素,以多糖提取率作为考察指标,选用L9(34)正交表安排试验考察各因素的影响,因素与水平见表1。

2 结果与分析

2.1 最大吸收波长的确定

精密量取供试品溶液与标准品溶液各0.05 mL,置5 mL容量瓶中,分别加1.0 mL去离子水、4%苯酚溶液1.0 mL,摇匀,加入浓硫酸5.0 mL,40 ℃水浴加热15 min,置冰水浴中冷却5 min,以相应的试剂为空白,同时制备供试品与标准品的未显色样品,按照紫外可见分光光度法,在200~800 nm范围内进行光谱扫描,续断多糖与葡萄糖样品显色后均在489 nm处有最大吸收,且对应未显色样品在489 nm处基本没有吸收,结果见图1。因此选择489 nm为测定波长。

2.2 标准曲线的绘制

精密吸取上述标准品溶液0、0.5、1.0、2.0、4.0、5.0 mL于50 mL容量瓶中,加去离子水稀释至刻度,得系列葡萄糖标准品溶液。以吸光度A为纵坐标,葡萄糖标准品浓度C为横坐标进行线性回归,得到标准曲线为:A=7.87C+0.004 36,r=0.999 3,结果表明,葡萄糖浓度在0.010 36~0.103 60 mg/mL范围内线性关系良好。

2.3 正交试验结果

以续断多糖的提取率为评价指标,筛选续断多糖的超声波辅助提取工艺,正交试验结果见表2。由表2极差分析可知,各因素的主次顺序为A、C、B,最佳提取工艺为A2C3B3,即用1∶20的料液比提取4次,提取时间为60 min,且续断多糖超声波辅助提取工艺中一定要控制好料液比和提取次数。分别精密称取3份续断药材,每份50 g,依据正交试验优选的最佳工艺条件提取续断多糖,结果测得续断多糖的平均提取率为7.472%,RSD为2.12%,说明该工艺稳定可行。

3 小结与讨论

本研究通过正交试验设计,初步建立了渝产续断多糖的超声波辅助提取工艺为料液比1∶20,提取时间为60 min,提取4次,结果测得续断多糖的平均提取率为7.472%,RSD为2.12%,表明该工艺稳定可行,为渝产续断的进一步开发利用奠定了基础。与已有研究结果[8-10]相比,渝产续断多糖含量高于黔产续断和五鹤续断,说明续断多糖的含量产地差异性较大,重庆为续断主产区,续断质量较优。

苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚生成橙黄色化合物,颜色持久,在490 nm左右有最大吸收,采用紫外可见分光光度法测定,简单、快速、灵敏、重复性好。

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(责任编辑 龙小玲)