陶兴魁 陈峰 赵志祥 张曼曼 操莉
（宿州学院生物与食品工程学院，安徽 宿州 234000）
【摘要】利用蓝莓的茎段为外植体，培养在添加不同浓度的6-BA和ZT的改良WPM培养基上，研究蓝莓离体繁殖影响因素，筛选蓝莓茎段诱导丛生芽的最佳培养基。结果表明：在WPM（改良）+ 6-BA 1.0mg/L + ZT 1.0mg/L的培养基上诱导的丛生芽数量最多，长势最好。
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关键词 蓝莓；组织培养；茎段；丛生芽诱导
基金项目：宿州学院特色种植业苗种生产工程技术研究中心开放课题（2014XKF19）；安徽省大学生创新创业项目（201310379045）。
作者简介：陶兴魁（1983—），男，安徽淮北人，硕士，研究方向为为植物生物技术。
蓝莓(blueberry)属杜鹃花科越橘属落叶小灌木。蓝莓果实风味独特，营养丰富，被誉为“世界第三代水果之王”[1]。蓝浆果低糖、低脂肪、抗氧化能力强，因此被国际粮农组织列为人类五大健康食品之一[2]。关于蓝莓的组培快繁，国内外已经有不少成功的报道[3-5]。本文以蓝莓茎段为材料研究不同激素配比对蓝莓茎段丛生芽诱导的影响情况，为进一步建立完善组培快繁体系提供技术支持。
1材料与方法
1.1外植体的选取
选择健壮、无病虫害的半木质化新稍，去除基部较老部位和顶梢细弱部分，用清水浸泡催芽，温度控制在20~25℃。
1.2外植体的灭菌
待枝条的腋芽萌发后，流水冲洗2~3小时，剪取长约1. 0~2. 0cm的带芽茎段，用清水反复冲洗，在超净工作台上用70%的酒精浸泡30s，0.1%氯化汞溶液灭菌5min，灭菌后用无菌水冲洗5~6次，并于无菌水中浸泡30min后取出用无菌滤纸吸干外植体表面的水分。
1.3诱导丛生芽萌发
以改良WPM培养基为基本培养基，培养基中添加蔗糖20mg/L，琼脂6g/L，pH值5.2，培养基在121℃、131kPa的条件下灭菌20min，接种后培养在温度为25±2℃，光强度为2500Lx，光周期为14h黑暗10h光照。
剪去茎段两端多余部分后，在无菌条件下将单芽茎段接种于WPM(改良)+ZT（0.5、1.0、1.5）mg/L+6-BA（0.5、1.0、1.5）mg/L+20g/L蔗糖+琼脂粉6g/L培养基上诱导丛生芽萌发。
2结果与分析
表1ZT与6-BA对蓝莓茎段丛生芽萌发的影响
注：+代表丛生芽萌发、生长情况，+越多表示萌发、生长情况越好．
观察试验结果表明，茎段在培养基上培养2~3d腋芽就开始膨大、萌动（如图1），经15~20d左右的培养就可以明显的观察到茎尖伸长，小叶片展开（如图2），30d左右苗高可达1.5~2.0cm。6~8周后芽长成4~5 cm左右的新梢，丛生芽同时也萌发出5~8个丛生芽。
由表1可以清楚的看出，不同浓度的ZT与6-BA对蓝莓茎段丛生芽萌发的影响情况。当6-BA和ZT的浓度均为0.5mg/L的较低浓度时，蓝莓茎段丛生芽的萌发缓慢，生长情况较差（如图3）；随着6-BA和ZT的浓度增大，蓝莓茎段丛生芽的萌发率越来越高，当6-BA 1.0mg/L和ZT 1.0mg/L组合时，萌发效率最高，生长情况最好（如图4）；但当6-BA和ZT等浓度继续升高时蓝莓茎段丛生芽的萌发率和生长速度都有所下降，故对于蓝莓茎段丛生芽的诱导过程中6-BA和ZT的浓度应适中，也不宜高于1.5mg/L。综合上述结果，应选择培养基WPM（改良）+ 6-BA 1.0mg/L + ZT 1.0mg/L的组合为蓝莓的丛生芽诱导培养基。
3讨论
我国蓝莓产业起步比较晚，很多品种都是从国外引进的，数量非常少。所以在这个前提之下只能选择组培快繁，才能够实现工厂化育苗，在短期之内就大量的繁育出我们需要的苗来。
对于蓝莓离体繁育而言，细胞分裂素是促进其生长分化的主要因素，本文通过试验筛选出蓝莓茎段最适诱导丛生芽的培养基为WPM（改良）+ 6-BA 1.0mg/L + ZT 1.0mg/L。下一步将对蓝莓试管苗的增殖、生根进行研究，以期建立完善的蓝莓组织培养体系。
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参考文献
［１］修英涛,常凤英,姜河,等.我国蓝莓(越橘)栽培研究现状及发展措施[J].辽宁农业科学, 2003(3):21－23.
［２］刘庆忠,赵红军,郑亚芹,等.高灌蓝莓微体繁殖技术研究初报[J].落叶果树, 2001(5):1－3.
［３］朱忠荣,聂飞.兔眼蓝浆果组织培养研究初报[J].贵州林业科技, 2003,31(4):20－22.
［４］DweikatM,LyrenePM.Adventitious shootsproduction from leavesofblueberry culturedin vitro[J].Hortscience,1998,23:629.
［５］Cao X,Hammerschlag F A, Douglas L .l A two-step pretreatmentsignificantly enhances shoot organogenesis from leaf explants of high-bush blueberry cv. Bluecrop[J].HortScience,2002,37(5):819－821.
［责任编辑：薛俊歌］