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景天三七对高血压的治疗作用及其有效成分分析

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  • 更新时间2022-08-02
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摘    要:目的:探究景天三七对高血压的治疗作用及其有效成分,初步探讨其作用机制及其在高血压治疗中的应用前景。方法:雄性SD大鼠制备高血压模型,随机分为模型组,景天三七组(2%、6%、10%),卡托普利组(30 mg/kg),假手术组。术后4周开始连续给药4周,取心脏测量心脏指数,进行HE染色和蛋白质印迹法;血清测定肌酸激酶(CK)活性;薄层层析鉴定景天三七中有效成分。结果:景天三七可明显降低血压;能逆转心肌重构;降低血清CK活性;降低心肌AT1蛋白表达,增加AT2和Catalase蛋白表达;槲皮苷、杨梅素为其有效成分。结论:景天三七含有槲皮苷、杨梅素两种降压成分,能够降压并逆转心肌重构。

关键词:景天三七;高血压;血管紧张素卫;卡托普利;槲皮苷;杨梅素;


高血压是常见的慢性病,也是心脑血管病最主要的危险因素[1]。当高血压导致的体循环高负荷长期存在时,心脏的代偿反应会引起结构和功能的变化[2]。早期的代偿性结构变化主要是心肌细胞肥大导致心室壁增厚[3]。当病理性刺激长期存在时,肥大心肌会发生失代偿,出现充血性心力衰竭[4],增加死亡率。而景天三七具有抗菌、强身健体、增强免疫力、治疗虚弱的功效[5]。但其研究和开发尚处于起步阶段。因此,本课题组拟采用肾性高血压大鼠模型,观察景天三七对血压的调控及靶器官的保护作用,初步探讨景天三七的作用机制,为阐明景天三七在高血压治疗中的应用前景提供新的治疗思路和理论依据,现报告如下。

1 资料与方法

1.1 实验动物

雄性健康SD大鼠,体质量120~150 g,购于北京维通利华实验动物技术有限公司,生产许可证号:SCXK(京)2012-0001。饲养温度(22±2)°C,湿度45%~60%,12 h光照,大鼠活动自由。

1.2 肾性高血压大鼠的制备

SD大鼠腹腔注射10%(5 g/50 m L)水合氯醛进行麻醉,备皮,75%酒精消毒,剪开皮肤和肌肉层,分离肾动脉,夹上直径为0.2 mm的银夹。假手术组为只暴露肾血管而不夹银夹,其余过程均一致[6]。

1.3 大鼠尾部无创血压测量

术后一周起,每周用无创血压BP-2010A测量血压,收缩压高于130 mm Hg的为造模成功,其余淘汰。每周测一次体重,观察血压对大鼠体重的影响。

1.4 实验分组

术后4周,将高血压大鼠随机分为6组:假手术组(Sham),模型组(HTN),景天三七组(2%、6%、10%),阳性对照组(卡托普利30 mg/kg,Cap组)。每天灌胃给药1次,连续给药4周,模型组和假手术组同法给予等容量生理盐水。

1.5 大鼠心肌肥厚指数的测定

给药4周后处死大鼠,取左、右心房和左、右心室,用生理盐水漂洗去血后称重,计算左心室搏功指数LVWI(LW/BW)和HWI(HW/BW)。

1.6 HE染色

心脏组织用多聚甲醛固定,经脱水、透明、石蜡包埋、切片后分别做HE染色,置于光镜下观察组织形态学变化。

1.7 CK活性测定

取血后加EDTA抗凝,离心(4℃,3 000 r/min,10 min)取上血清。按CK试剂盒的说明书进行检测。

1.8 Western blot

心脏组织匀浆后,进行蛋白定量,12%十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)并转移至聚偏二氟乙烯(PVDF)膜。室温下用5%牛奶液封闭2 h,加入一抗4℃过夜。用TBST清洗条带3次,加入辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔孵育2 h;洗膜后ECL显影分析条带。

1.9 薄层层析鉴定景天三七中的有效成分

将槲皮苷、杨梅素标准品加入80%乙醇溶解,配制展开剂。薄层板上从左至右依次是杨梅素、槲皮苷、待测样品。放在展开缸中展开。最后氨熏显色,分析成分。

2 结果

2.1 景天三七对大鼠血压的影响

术后Sham组和HTN组大鼠的体重均逐渐增加,两组间无统计学意义(P>0.05)。HTN组大鼠收缩压(SBP)和平均动脉压(MAP)明显高于Sham组,给予景天三七可明显降低SBP和MAP,且呈剂量依赖性,中高剂量组差异均具有统计学意义(P<0.05),见图1。

图1 景天三七对收缩压和平均动脉压的影响

注:A、B↓处为开始给药,C、D分别为给药4周后大鼠收缩压(SBP)、平均动脉压(MAP);与Sham组比较,*P<0.05;与HTN组比较,#P<0.05,n=8。

2.2 景天三七对心肌重构的影响

与Sham组相比,HTN组大鼠心肌细胞肥大、增粗、有较多分支。心肌细胞核固缩,核深染;纤维紊乱并发生断裂,给药后有所改善,其中高剂量组有显著差异(P<0.05)。与Sham组相比,HTN组大鼠LVWI和HWI均显著升高;与HTN组相比,给予景天三七后LVWI和HWI均降低,高剂量组有显著差异(P<0.05),见图2。

图2 景天三七对心肌重构的影响

与Sham组比较,*P<0.05;与HTN组比较,#P<0.05。

2.3 景天三七对CK活性和Ang受体的影响

与Sham组相比,HTN组大鼠的CK活性显著升高;与HTN组相比,各浓度景天三七及Cap组大鼠的CK活性均显著降低,呈剂量依赖性。与Sham组相比,HTN组大鼠的Catalase蛋白表达下降,给予景天三七后表达升高。HTN组大鼠心肌内AT1R的含量增加。给予不同浓度景天三七后,大鼠心肌内AT1的表达均有下降,AT2的表达均上升,其中高剂量组有显著性差异(P<0.05),见图3。

图3 景天三七对心肌组织蛋白表达和血清CK活性的影响

2.4 成分分析

与标准品对比,景天三七含有两种有效成分:杨梅素和槲皮苷,见表1。

表1 成分分析

3 讨论

本研究结果显示,景天三七可明显降低血压,使心脏指数和形态学均有所改善,表明其可逆转心肌重构,具有心脏保护作用[7]。HTN大鼠血清CK升高,可能由于CK多分布于细胞膜的Na+/K+-ATP酶[8]及肌浆网的Ca2+-AT P酶[9]等ATP再生活跃的部位,为心血管收缩提供ATP。而HTN大鼠心肌收缩需要消耗大量ATP[10],因此CK活性有所升高。景天三七可能使血管平滑肌舒张,降低血压,最终使CK活性降低。

HTN组大鼠心肌组织中Catalase含量下降,说明高血压可增强氧化应激[11]。高血压大鼠体内AngⅡ水平较高,AngⅡ与AT1结合可下调Catalase的表达而导致氧化应激的发生,从而导致氧化应激水平上升,从而使活性氧的产生和抗氧化机制失调,最终引起组织损伤。景天三七可增加Catalase的表达,其作用机制可能是其影响RAS,下调AT1、上调AT2,从而使Catalase表达增加,使体内氧化应激水平降低。

综上所述,景天三七有明显的降压作用,能逆转左心室重构,增强抗氧化能力,可能与影响血管紧张素受体表达有关,为抗高血压药物的研发提供更多的依据。