谢小丽
湘潭市湘钢医院，湖南湘潭411101
[摘要] 目的 探讨p16、Ki-67在宫颈良性病变与CIN中的表达差异及意义。方法 选择该院病理科保存的宫颈组织石蜡包埋蜡块108例，包括正常宫颈组织22例，宫颈上皮内瘤样变（CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ） 86例，采用SP免疫组织化学法检测p16、Ki-67在宫颈良性病变与CIN中的表达情况。结果 p16及Ki-67蛋白在宫颈炎性组织及CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ中表达阳性率呈逐渐增高趋势，CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ中p16蛋白阳性表达率明显高于正常宫颈组织，差异有统计学意义（P<0.05），CINⅠ中，Ki-67蛋白阳性表达率与宫颈炎性组织差异无统计学意义（P>0.05），但CINⅡ、Ⅲ中Ki-67蛋白阳性表达率明显高于宫颈炎性组织，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 p16及Ki-67蛋白在宫颈炎症与CIN组织中表达，差异有统计学意义（P<0.05）， p16联合Ki-67可用于鉴别宫颈良性病变及CIN，以及CIN病变程度的判定，对临床早期预防治疗宫颈癌有重要价值。
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关键词 宫颈良性病变；宫颈上皮内瘤样变；p16；Ki-67
[中图分类号] R737.33[文献标识码] A[文章编号] 1674-074２（２０１4）04（c）－０171-02
[作者简介] 谢小丽（1976-），女，湖南永州人，本科，主治医师，主要从事临床病理诊断工作，邮箱：278813482@qq.com。
宫颈上皮内瘤变（CIN）是一组与宫颈癌密切相关的癌前病变，包括宫颈不典型增生和宫颈原位癌，反映了宫颈癌发生中连续发展的过程，即由宫颈不典型增生（CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ）→原位癌→浸润癌的病理变化[1]。CIN的生物学行为难以预测，因此准确判断CIN及明确CIN分级对区分宫颈良恶性病变、早期预防或诊断宫颈癌有中药意义。为探讨p16、Ki-67在宫颈良性病变与CIN中的表达差异及意义。该研究于2008年10月—2013年6月期间采用免疫组织化学法检测p16、Ki-67在宫颈良性病变与CIN中的表达差异，研究其病理价值，报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择该院病理科保存的宫颈组织石蜡包埋蜡块108例，标本来源为宫颈炎性病变患者22例，宫颈上皮内瘤样变患者86例（包括CINⅠ26例，CINⅡ38例，CIN Ⅲ 22例），均经高职称病理医师阅片诊断，患者年龄21~63岁，平均（36.2±7.5）岁。
1.2 方法
全部标本均经福尔马林固定，石蜡包埋，每份标本切片4张，厚度为4 μm，然后行病理检查，免疫组化采用链霉素亲生物素蛋白过氧化物酶（S-P）检查法，标本切片行微波抗原修复预处理后，加入鼠抗人Ki-67、p16单克隆抗体，行p16、Ki-67免疫组化S-P染色，具体操作步骤按照SP试剂盒说明书进行；用Tris盐缓冲洗液代替一抗作阴性对照；最后采用DBA 显色剂显色后行镜下观察。检查中使用的显色剂及SP检测试剂盒均购自福建迈新生物技术有限公司。
1.3 观察方法
每张切片选择5个高倍视野（×200），观察阳性染色情况。p16表达：细胞质或细胞核出现黄色或棕黄色染色为阳性表达；局部单个细胞染色，阳性细胞百分率<5%为p16表达阴性；散在团状、片状、弥散性细胞染色，阳性细胞百分率为5%～24%，25%～50%，>50%，依次判定为弱阳性、阳性、强阳性。Ki-67表达：细胞核出现棕黄色染色为阳性表达，细胞核无着色为阴性表达[2]。
1.4 统计方法
数据录入spss17.0统计学软件进行分析处理，计数资料组间比较采用χ2检验。
2 结果
p16及Ki-67蛋白在宫颈炎性组织及CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ中表达阳性率呈逐渐增高趋势，其中，p16在CINⅢ中表达阳性率达100.0%。CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ中p16蛋白阳性表达率明显高于正常宫颈组织，差异有统计学意义（P<0.05），CINⅠ中，Ki-67蛋白阳性表达率与宫颈炎性组织，差异无统计学意义（P>0.05），但CINⅡ、Ⅲ中Ki-67蛋白阳性表达率明显高于宫颈炎性组织，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。
3 讨论
宫颈上皮内瘤变是宫颈癌前病变，近年来研究发现人类乳头状瘤病毒（HPV）有致癌性，HPV感染HPV感染作为一种特殊类型的性传播疾病，是子宫颈上皮内瘤样病变和宫颈癌发生的重要影响因素[3]。分子生物学研究显示CINⅠ及亚临床HPV感染常为HPV6、11型，80%CINⅢ为HPV16型感染。
P16基因是一种多肿瘤抑制基因，可直接作用于细胞周期，抑制细胞进入S期和DNA合成的启动，起到抑制细胞分裂的作用[4]。P16基因的表达缺失可导致细胞过度增殖，产生肿瘤。国内有学者研究显示宫颈癌组织中P16蛋白表达明显高于非癌组织，说明P16蛋白可能与宫颈癌的发生有关[5]。Klaes等[6]认为P16基因与CIN尤其是高度CIN的发生密切相关，因此可将P16蛋白用于鉴别CINⅢ与宫颈炎症、宫颈基底上皮增生。郭东辉等[7]研究认为P16蛋白在宫颈炎及CINⅠ组织中不表达，与Klaes等[6]认为P16在CINⅠ级合并高危HPV感染时才表达的报道相符。但该研究中，CINⅠ级P16蛋白表达阳性率为65.4%，明显高于宫颈炎组织，说明P16蛋白在两者鉴别中有较高的应用价值，尤其是CINⅢ与宫颈炎症的鉴别。但CINⅠ、CINⅡ级病例中中也存在部分P16阴性表达，因此该研究认为单独用P16蛋白鉴别CINⅠ与宫颈炎结果并不完全准确，可结合Ki-67进行联合鉴别。Ki-67是细胞增殖相关蛋白，可反映肿瘤的增生活性[8]。本研究显示由宫颈炎到CINⅢ病变，Ki-67表达阳性率也呈现逐渐增高的趋势，并且CINⅡ、CINⅢ中Ki-67表达阳性率明显高于宫颈炎症，另外Ki-67的表达与P16具有较高的一致性。由此笔者认为临床可P16、Ki-67对CIN进行联合判定，P16、Ki-67高度阳性表达的CINⅡ、Ⅲ级病例应及时采取处理措施，对P16、Ki-67阳性表达的CINⅠ级病例也应密切观察随访。
综上所述，研究认为p16及Ki-67蛋白在宫颈炎症与CIN组织中表达差异有统计学意义，p16联合Ki-67可用于鉴别宫颈良性病变及CIN，以及CIN病变程度的判定，对临床早期预防治疗宫颈癌有重要价值。
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参考文献
[1] 田琦，盂刚.p16、ki-67在宫颈鳞癌及宫颈上皮内瘤变组织中的表达及临床意义[J].中国老年学杂志，2011，31（17）：23-25.
[2] 杨君，王彬，周德平，等.P16蛋白检测在预测Ⅰ级宫颈上皮内瘤变进展风险中的应用价值评价[J].国际检验医学杂志，2012，33（5）：524-525，527.
[3] 刘爽，李亚里，刘爱军，等.P16INK4A及Ki-67在宫颈腺癌组织中的表达及意义[J].解放军医学杂志，2012，37（3）：225-228.
[4] 秦锦龙，丘瑾，成佳景.P16ink4α在宫颈上皮内瘤变中的表达及意义[J].同济大学学报：医学版，2012，33（2）：68-71.
[5] 陈军，李伟，樊德利，等.宫颈病变患者人乳头状瘤病毒16的生物状态和P16蛋白的表达[J].中国卫生检验杂志，2012（5）：1112-1115.
[6] Klaes R， Benner A， Friedrich T，et al. p16INK4a immunohistochemistry improves interobserver agreement in the diagnosis of cervical intraepithelial neoplasia[J]. Am J Surg Pathol，2002，26（11）：1389-1399.
[7] 郭东辉，刘智慧，范幼奇，等.p16、cyclin E在宫颈鳞状上皮病变诊断中的应用[J].诊断病理学杂志，2004，11（3）：162-163，i009.
[8] 苏静，郑杰.肿瘤增殖标记分子Ki-67和增殖细胞核抗原及其在病理诊断中的应用[J].中华病理学杂志，2009，38（8）：58-571.
（收稿日期：2014-01-12）
论文中医学名词术语的使用
1.冠以外国人名的体征、病名、试验、综合征、方法、手术等，人名可以译成汉语，但人名后不加“氏”字；也可以用外文，但人名后不加“′s”。例如：Babinski征，可以写成巴宾斯基征，不写成Babinski′s征，也不写成巴宾斯基氏征。若为单字名则仍保留“氏”字。例如：福氏杆菌。
2.名词术语一般应用全称，若全称较长且反复使用，可以使用缩略语或简称，但在摘要和正文中第一次出现时，均应分别注明全称和简称。例如：流行性脑脊髓膜炎（流脑），阻塞性睡眠呼吸暂停综合征（obstmctive sleep apnea syndrome，OSAS）。西文缩略语不宜拆开转行。不要使用临床口头简称（例如将“人工流产”简称“人流”）。凡已被公知公认的缩略语可以不加注释直接使用。例如：DNA、RNA、HBsAg、HBsAb、PCR、CT、DIC等。