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322例乙型肝炎患者实时荧光定量PCR检测与血清标志物的相关性分析

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  • 更新时间2015-09-16
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王 岩

河南省郑州市黄河科技学院附属医院检验科,河南郑州 450063

[摘要] 目的 探讨乙型肝炎病毒感染者血清HBV DNA定量与血清乙肝病毒标志物的关系。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测血清HBV-DNA含量,酶联免疫法检测血清乙肝病毒标志物。结果 大三阳组HBV-DNA阳性率及含量显著高于其他组,差异有统计学意义(P<0.05);HBeAg阳性患者中,HBV-DNA阳性率为100%,与HBeAg阴性组比较,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论 要准确了解乙型肝炎患者体内的病毒复制情况,采用FQ-PCR和HBV血清学标志物检测相结合的方法,才能在乙型肝炎的诊断、病情判断、治疗方案的选择及预后方面提供可靠的依据。

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关键词 HBV-DNA; FQ-PCR;乙型肝炎血清标志物

[中图分类号] R450;R512.62   [文献标识码] A   [文章编号] 1674-0742(2014)03(b)-0177-02

[作者简介] 王岩(1975.2-),女,河南郑州人,硕士,主管技师,研究方向:生物化学与分子生物学。

乙型肝炎是严重影响人民健康的世界性慢性疾病,是引起肝硬化、原发性肝癌的主要原因。实时荧光定量PCR是一种敏感的反映HBV病毒水平的检测方法,可以为病情判断和药物治疗提供依据。该文旨在通过比对实时荧光定量PCR方法和传统的ELISA法检测乙型肝炎病毒在不同模式下的检测结果,探讨两种方法在检测乙型肝炎方面的相关性。现分析2012年5月—2013年5日间来该院就诊的322例乙型肝炎患都的临床资料,报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取来该院就诊的322例乙型肝炎患者为研究对象。其中男性158例,女性164例,平均年龄38.2岁。实验分为4组,分别为大三阳组(50例);小三阳组(119例);①⑤阳性组(56例);②④⑤阳性组(97例)。

1.2 试剂与仪器

仪器为ABI7500Fast荧光定量分析仪。

1.3 方法

HBVDNA用FQ-PCR检测;HBV血清标志物用ELISA检测,按照试剂盒说明操作。

德国罗氏公司荧光量PCR仪为德国赛博公司产品。FQ-PCR方法检测HBV-DNA试剂盒由广州安基因科技有限公司提供,ELISA法试剂购自北京万泰生物药业股份有限公司,检测仪器为BIO-RADMODEL550型酶标仪。

采集空腹静脉血,分离出血清,采用ELISA方法检测HBgAg、HBsAb、HBeAg、HBeA、HBcAb,用FQ-PCR法检测HBV-DNA, 用已知含量梯度的HBV-DNA标准品为参考照物,对比得出本DNA含量,并设置阴性对照,采用室内Roche免疫质控血清进行检测。操作方法和结果判定均严格按说明书执行。HBV-DNA>5×103copies/ml为阳性,<5×103copies/ml为阴性。

1.4 统计方法

数据用spss19.0统计学软件对数据进行处理。计数资料采用χ2检验。

2 结果

不同血清模式组中乙肝病毒标志物阳性率。

322例标本中,第①组(大三阳组),HBV-DNA阳性率及HBV-DNA含量显著高于其他组,差异有统计学意义(χ2=29.835,p<0.01);第②组、第③组之间差异不大,但和第④组比较差异有统计学意义(χ2=60.393,p<0.01),见表1、2。

不同血清模式组中HBV-DNA含量显示,不同组别的HBV-DNA含量有较大差异。第①组HBV-DNA平均含量为3.86 ×10IU/mL,和后三组比较,差异有统计学意义。

在50例HBeAg阳性患者中,HBV-DNA阳性率为100%,明显高于与HBeAg阴性组,两者差异有统计学意义(χ2=75.983,p<0.01)。见表3。

3 讨论

ELISA法检测乙肝病毒标志物是传统的灵敏度高、特异性较好的方法 [1],但它只能反映乙肝病毒入侵后机体的免疫状态,而FQ-PCR则是从基因水平定量反映乙肝病毒是否感染、复制的一种更灵敏的检测方法,目前已广泛的应用于临床。

本研究显示不同的乙型肝炎血清标志物表达模式,HBV-DNA的含量相差甚大。在大三阳组中HBV-DNA阳性率为100%,含量超过平均含量为3.86×107IU/mL,显著高于其它组,表明大三阳患者体内乙肝病毒复制活跃,传染性强。HBeAg位于乙肝病毒的核心,是HBV基因组前C/C区段的mRNA表达,通常被认为是病毒复制活跃、传染性强的标志[2]。该研究结果表明,50例HBeAg阳性患者中,HBV-DNA阳性率为100%,二者具有明显的伴随关系,呈正相关性;而在174例HBeAg阴性的患者中,也并非没有HBV-DNA的复制,推测可能与HBV基因组发生突变有关。基因突变时,HBeAg表达会减弱甚至消失,因此即使抗-HBe出现,病毒复制并没有停止,一部分人群仍具有传染性,并且此类人群以肝硬化者居多[3],需要引起重视。本研究中,在HBsAb阳性的患者中,检出7例HBV-DNA阳性,说明即使抗-HBs及抗-HBe出现,病毒依然具有低水平的复制能力,这可能是机体正处于隐形感染的恢复期或病毒已发生变异[4],因此,HBV血清标志物不能取代HBV-DNA定量检测。

综上所述,在乙型肝炎的诊断和治疗方面,单纯检测HBV血清标志物是不全面的,应结合HBV-DNA定量来对病情进行判断和治疗[5]。HBeAg转阴并不意味这HBV病毒已被清除[6]。因此,要准确了解乙型肝炎患者体内的病毒复制情况,采用FQ-PCR和HBV血清学标志物检测相结合的方法,才能在乙型肝炎的诊断、病情判断、治疗方案的选择方面提供更加可靠的依据。

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参考文献

[1] 实时荧光PCR检测乙型肝炎患者HBV-DNA的临床意义[J].临床和实验医学杂志,2012,11(18):1483-1485.

[2] Jaroszewicz J,Serrano BC,Wursthorn K,et a1.Hepatitis B surface antigen (HBsAg) levels in the natural history of hepatitis Bvirus (HBV)一infection:A European perspective [J]Journal of Hepatology,2010,52(4):514-522.

[3] 黄松洁,林永志.HbeAg定量与HBV-DNA定量的相关性及临床意义[J].检验医学与临床,2010.7(12):1236-1239.

[4] 邹敏.实时荧光PCR检测在乙型肝炎病毒DNA检测方面的临床意义[J].中国医药指南,2010,8(19):196-197.

[5] 乙型肝炎血清标志物定量检测与HBV-DNA定量检测的相关性及临床意义[J].西部医学,2012,24(5):987-991.

[6] Chemin I,Zoulim F,Merle P,et a1.High incidence of hepatitis B infections among chronic hepatitis cases of Unknown aetiology[J].J Hepatol,2001,34(3):447-454.

(收稿日期:2013-12-05)