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糖尿病肾病动物模型建立的体会

  • 投稿宇航
  • 更新时间2015-09-16
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代招弟

内蒙古民族大学附属医院,内蒙古通辽028000

【摘要】目的:建立糖尿病肾病(DN)大鼠模型。方法:取Wistar大鼠24只,随机分为空白对照组(12只)和模型组(12只)。模型组采用单纯腹腔注射1%链脲佐菌素(STZ)悬液,复制Wistar大鼠糖尿病肾病动物模型。结果:单纯腹腔注射1%链脲佐菌素悬液4周可成功复制糖尿病肾病大鼠动物模型。结论:采用单纯腹腔注射链脲佐菌素方法复制糖尿病肾病大鼠模型,该方法具有简便、容易掌握,短期内可诱导出大量满意的动物模型。

教育期刊网 http://www.jyqkw.com
关键词 链脲佐菌素悬液;糖尿病肾病;动物模型

【中图分类号】R587 2【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517(2015)01-0113-02

1仪器与药物

1 1仪器SPS401F 型电子天平(北京西杰公司);GT10-2 台式高速离心机(北京时代北利仪离心机仪器有限公司);PRONTO-E全自动生化分析仪(意大利奔腾);强生血糖仪(美国强生公司);强生血糖试纸(美国强生公司);HY-612 半自动尿液化学分析仪(深圳市汇研科创生物科技有限公司);HMIAS-2000彩色病理图文分析系统(北京杰伟世视音频设备有限公司);KD-BM生物组织包埋机(浙江省华市科迪仪器设备有限公司);KD-3358电脑超薄切片机(浙江金华科迪仪器设备有限公司)。

1 2试剂链脲佐菌素(streptozotocin C8H15N3O7,美国Sigma公司) ;柠檬酸(北京东方博爱生物科技有限公司);柠檬酸钠(北京东方博爱生物科技有限公司);肌酐(批号:A70333,上海抚生生物科技有限公司);尿素试剂盒(批号:A64247,上海抚生生物科技有限公司);其余试剂均为分析纯。

1 3STZ悬液的配制柠檬酸缓冲液母液的配法:柠檬酸1 9214g加入二蒸水100ml配成A液,柠檬酸钠2 9410g加入二蒸水100ml配成B液。1%链脲佐菌素缓冲液的配制:将A、B液按比例(1∶1 32)均匀混合,其pH值为4 19~4 22,将此缓冲液配成1%链尿佐菌素悬液。

1 4试验动物Wistar大鼠,由吉林大学白求恩基础医学院实验动物中心提供,卫生许可生产号:SCXK-(吉)2007-0003。

2方法

2 1造模方法及分组[1-2]选雄性Wistar大鼠24只,体重250~280g,随机分为空白对照组(12只)和模型组(12只)。将模型组禁食12h后,用0 1mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液将链脲佐菌素配成1%的悬液,按56mg/kg体重单次腹腔注射1%链脲佐菌素悬液复制糖尿病肾病模型。腹腔注射66h后开始禁食,不禁水,由尾静脉取血测定血糖,血糖≥16 8mmol/L者,为糖尿病造模型成功。

2 2观察与检测指标观察情况:每天观察大鼠的一般精神状态、毛色、进食、饮水及尿量等,模型建立成功后,每两周测定一次大鼠的体重,并加以记录。空腹血糖:模型建立成功后,分别在第二、第四周末断尾取血,采用血糖仪测定一次血糖。尿糖:模型建立成功后,分别在第二、第四周末,将大鼠放入洗净的代谢笼内,收集尿液,用自动尿液分析仪测定。第四周末(腹主动脉血)采用生化分析仪检测。

2 3统计方法采用Excel软件进行数据处理,数据用均数±标准差(x±s)表示,采用t检验,P<0 05表示差异有统计学意义。

3结果

3 1一般表现空白对照组大鼠一般精神状态、毛色、饮食及尿量均正常。模型组大鼠于单次腹腔注射1%链脲佐菌素缓冲液3天后,即出现多食、多饮、多尿以及消瘦的状况。在实验期内,模型组大鼠体重一直下降,而空白对照组大鼠体重一直增加,见表1。

3 2血糖变化在本次实验过程中,空白对照组大鼠的血糖始终维持在5mmol/L,范围以内。模型组造模后第二、第四周末血糖明显高于对照组(P<0 01),见图2。空白对照组大鼠尿糖一直阴性,而模型组大鼠尿糖幅度很大,一直处于+++~++++之间。

3 3肌酐及血尿素氮造模4周后,模型组大鼠血肌酐、血尿素氮与空白对照组大鼠同期比较显著升高(P<0 01),见表1。

3 4肾组织切片由图3、4可知,空白对照组大鼠肾小球、肾小管结构均正常,肾小管上皮细胞完整,未见管型变。 由图3、4可知,模型组大鼠部分肾小球肥大、增生,肾小球内毛细血管充血,与之相连近曲小管上皮水肿、空泡变,肾间质血管充血显著。

4讨论

慢性肾功能衰竭(CRF)是严重危害人类健康的多发病之一,其发病率呈逐年上升的趋势,是世界性难题之一[2]。现代医学领域中有很多糖尿病肾病动物模型的方法,如手术切除胰腺法、药物破坏胰岛素β细胞法及药物与手术(5/6肾脏切除)联合制作法等,其中笔者选用单次大量腹腔注射1%链脲佐菌素缓冲液诱导速发型糖尿病模型[2]。本次试验结果证明,单纯腹腔注射链脲佐菌素溶液后4周时可成功的造成糖尿病肾病大鼠模型。该方法简便、容易掌握,短期内可诱导出大量满意的动物模型。

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参考文献

[1] 中华医学会糖尿病学分会.2007年版中国2型糖尿病防治指南[J].中华流行病学杂志,2008,24(2):22-23.

[2] 王春艳.链脲佐菌素诱导大鼠2型糖尿病模型的建立[J].吉林医药学院学报,2010,2(1):22.

(收稿日期:2014 09 22)