金晓东
湖北省郧县人民医院 湖北省郧县 442500
【摘 要】目的：探讨P-gp、GST-π 和TopoII 在涎腺良、恶性多形性腺瘤多药耐药基因的表达情况及意义。方法：应用免疫组织化学技术(SP 法) 检测19 例涎腺恶性多形性腺瘤（MPA）、27 例涎腺良性多形性腺瘤（PA）及12 例正常涎腺组织中P-gp、GST-π 和TopoII 的表达。结果：涎腺恶性多形性腺瘤组织中P-gp、GST-π 和TopoII 表达阳性率分别为89.5%(17/19)、94.7%(18/19) 和26.3%(5/19)；涎腺良性多形性腺瘤组织中P-gp、GST-π 和TopoII 表达阳性率分别为88.9%(24/27)、37.0%(10/27) 和25.9%(7/27)；正常涎腺组织中P-gp、GST-π 和TopoII 表达阳性率分别为58.3%(7/12)、41.7%(5/12) 和0%(0/12)。涎腺恶性多形性腺瘤中GST-π 表达阳性率高于良性多形性腺瘤，差异有统计学意义（P<0.001）。结论：GST-π 在涎腺恶性多形性腺瘤的多药耐药机制中具有重要作用。检测P-gp、GST-π 和TopoII 可为临床拟定化疗方案提供依据，也可作为判断涎腺恶性多形性腺瘤预后的参考。
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关键词 多药耐药；P-gp；GST-π；TopoII；涎腺；多形性腺瘤；免疫组织化学
1 材料和方法
1.1 标本来源
选择我院病理科2012 年7 月~2014 年9 月存档涎腺恶性多形性腺瘤组织蜡块19例，病史完整。年龄范围15~72 岁，平均51.5 岁，其中男性11 例，女性8 例，术前均未接受化疗和/ 或放疗。另27 例涎腺良性多形性腺瘤，正常涎腺组织12 例。以上病例组织标本连续切片，常规制成4 张4μm 石蜡切片。取1 张进行常规HE 染色，余3 张进行免疫组化染色。
1.2 主要试剂
鼠抗人P-gp、GST-π、TopoII 单克隆抗体、过氧化物酶标记的链霉卵白素(SP)染色试剂盒和显色剂DAB 试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。
1.3 免疫组化染色
常规免疫组织化学SP 法染色，DAB显色，苏木精复染，中性胶封片，显微镜下观察。用己知阳性组织切片作阳性对照，以PBS 代替一抗作阴性对照。
1.4 结果判定
细胞内出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性细胞。记分方法：无色为0 分，淡黄色为1 分，棕黄色为2 分，棕褐色为3 分。实验切片在高倍(×400) 显微镜下观察，随机选取5 个视野，各记数200 个肿瘤细胞，再将阳性细胞所占的百分比打分：0 分为阴性，1 分为阳性细胞<10% , 2 分为11%-50% , 3 分为51%-75% , 4 分为>75%。染色强度与阳性细胞百分比乘积>3 分时为免疫反应(+)。
1.5 统计学处理
应用spss16.0 统计软件对数据采用四格表确切概率法及Spearman 相关性检验进行统计学分析，P<0.05 被认为有统计学意义。
2 结果
P-gP 阳性表达定位于细胞膜或细胞质上，GST-π 阳性表达定位于细胞质和部分细胞核，TopoII 阳性表达定位于细胞核。P-gp、GST-π 和TopoII 在19 例涎腺恶性多形性腺瘤、27 例涎腺良性多形性腺瘤及12例正常涎腺组织中均有不同程度表达，其中恶性多形性腺瘤中GST-π 的阳性表达率明显高于良性多形性腺瘤，差异有统计学意义（P<0.001）。
19 例涎腺MPA 组织中P-gp 、GST-π和Topo II 阳性表达与患者年龄、性别、肿瘤的大小、分化程度、临床分期无相关性，差异无统计学意义(P>0.05)
19 例涎腺MPA 组织中P-gp 和GST-π的共表达率为47.4%（9/19），两者的表达呈正相关(r=0. 5864, P<0.05)；P-gp 和Topo II 及GST-π 和Topo II 之间的相关性均无统计学意义。27 例涎腺PA 中P-gP 、GST-π、TopoII 三者表达之间均无明显相关性（P>0.05)。
3 讨论
P- 糖蛋白(P-gp) 是腺苷三磷酸( ATP)依赖性药物外排转运体，属ATP 结合盒(ATP binding cassette，ABC) 转运家族中最大的一个亚系[1]。P-gp 属于单向药物外输蛋白质，在耐药癌细胞膜表面呈现高表达，最终导致化疗效果降低。另外， 还可通过p-Akt 途径介导P-gp 的肿瘤多药耐药。
拓扑异构酶- Ⅱ（Topo- Ⅱ）通过催化DNA 双链的断裂而改变空间结构，降低ATP 与酶结合的能力，影响染色体分离、基因重组和转录及 DNA 损伤与修复。所以肿瘤对化疗药物的敏感性取决于Topo- Ⅱ的水平，Topo- Ⅱ表达水平下降，肿瘤对化疗药物的敏感性下降，耐药性增高。
本研究中19 例涎腺恶性多形性腺瘤组织中仅有5 例TopoII 阳性表达， 表达率为26.3 %，与段树全等报道的直肠癌中66.7%(44/126) 等其他肿瘤相比处于较低水平，提示涎腺恶性肿瘤细胞化疗药物靶点相对较少，使其对以TopoII 为靶点的化疗药物有一定的耐药性。
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参考文献
[1] 冯慧玲, 熊玉卿. 与P- 糖蛋白及MDR1 基因关联的药物转运研究现状[J]. 中国临床药理学杂志,2014,30(11):1062-1064.
[2]Baguley BC. Multidrug resistancei n c a n c e r [ J ] . M e t h o d s M o lBiol,2010,596:1-14
[3] 应为民, 华成舸. 转移性多形性腺瘤的研究进展[J]. 国际口医学杂志,2008,35( 增刊):193-194.