郭浩 郭莉 唐斌 杜丽 骆明勇 秦丹卿 王奕霞 王继成
摘要】目的探讨胎儿脐血血红蛋白电泳Hb A值在孕中、晚期诊断β-地中海贫血以及母血污染鉴定的应用价值。方法收集父母双方为β-地中海贫血携带者作为指征进行产前诊断且孕周为24~28 w的胎儿54例。应用全自动毛细管电泳系统对胎儿脐带血进行电泳分析，且采用反向点杂交法检测β地中海贫血基因。 结果12例β-地中海贫血基因型正常的胎儿脐带血Hb A的平均值为(6.3%±1.9%)；31例β杂合突变的Hb A值范围为2.6% ~3.7%；10例基因纯合突变或双重杂合突变中有6例胎血Hb A为0，4例为0.4%~0.7%；母血污染1例。结论脐血血红蛋白电泳Hb A值可辅助诊断轻型、中间型及重型胎儿β-地中海贫血，并可以作为母血污染鉴定的一种方法。
【关键词】脐血 血红蛋白电泳 产前诊断 β地中海贫血 母血污染
β-地中海贫血是由于血红蛋白β珠蛋白基因突变导致β珠蛋白肽链缺如（β0）或合成不足（β+），从而引起的遗传性溶血性贫血病。目前地中海贫血产前诊断报道以基因诊断为主，辅助诊断胎儿α-地中海贫血的方法学报道较多［1-2］，而辅助诊断胎儿β-地中海贫血的脐血血红蛋白组分分析报道较少。本文总结54例应用脐血血红蛋白电泳Hb A值辅助诊断孕中晚期胎儿β-地中海贫血的病例，现报告如下：
1对象与方法
1.1研究对象
收集2013年1月~2014年2月，父母双方为β地中海贫血携带者作为指征进行产前诊断且孕周为24~28 w的胎儿54例。
1.2方法
B超介导下经母腹行脐静脉穿刺术，抽取脐带血1 ml。取18 μl脐带血用90 μl溶血液稀释，采用sebia公司全自动毛细管电泳系统及配套试剂检测脐带血血红蛋白组分。应用聚合酶链式反应及反向斑点杂交法检测17种常见β-地中海贫血基因。
2结果
54例胎儿脐带血经β-地中海贫血基因诊断，结果显示12例正常，42例异常。其中12例基因型正常胎血Hb A的平均值为(6.3%±1.9%)；31例β基因杂合突变胎血Hb A值范围为2.6%~3.7%；10例基因纯合突变或双重杂合突变中有6例胎血Hb A为0，4例为0.4%~0.7%；母血污染1例。
3讨论
人体血红蛋白在胚胎、胎儿和成人3个不同的发育阶段合成的种类存在差异。从胚胎到成人，珠蛋白生成变化的规律为：α-和β-珠蛋白基因簇沿着5’端至3’端的方向依次表达［3］。Hb F（α2γ2）在胎儿6个月时，含量可高达90%，是胎儿时期主要的血红蛋白。孕周24~28 w的胎儿脐带血中除了有含量高的Hb F，也可检测到Hb A（α2β2）。分析胎儿脐血血红蛋白电泳的Hb A值，可辅助诊断胎儿β-地中海贫血。本研究结果显示，正常胎儿Hb A平均值为(6.3%±1.9%)；31例β基因杂合突变胎血Hb A值范围为2.6%~3.7%；10例基因纯合突变或双重杂合突变中有6例胎血Hb A为0，4例为0.4%~0.7%。在胎儿时期，β基因杂合突变的基因型虽然仍能合成部分的Hb A，但Hb A值较正常胎儿相比已经明显减少。其中基因型βCD26/βN一例，即我国常见的异常血红蛋白Hb E，由于β链的第26位密码子发生GAG>AAG突变，导致谷氨酸被赖氨酸代替所致，因此除了能检测到Hb A，还检测到少量的Hb E。通常重型β-地中海贫血（基因型为β0/β0）在胎儿时期完全不能产生Hb A。而中间型β-地中海贫血（基因型为β0/β+），可生成少量Hb A。如本研究中基因型为β-28/βCD17和βCD41-42/β-28的病例，血红蛋白电泳结果提示可检测到微量的Hb A值。这是由于-28突变位点位于TATA盒，虽然影响mRNA转录效率，但对珠蛋白合成的影响较为温和，尚能合成一定量的β肽链，产生少量Hb A。
本研究检出一例βCD17/中国型 Gγ+(Aγδβ)0，Hb A值为0，符合重型β-地中海贫血脐血血红蛋白组分的特点。中国型 Gγ+(Aγδβ)0不在17种常见β-地中海贫血基因检测范围内，属于罕见型缺失型β-地中海贫血。通常是由于β类珠蛋白基因簇多个成员的大片段缺失，导致出生后γ-基因开放并高表达，具体体现为本应关闭的γ-基因代偿性地替代β-基因，其表达产物Hb F在成人时期仍高表达［4］。该病例是由于父母双方均为β-地中海贫血携带者作为产前诊断指征而采集的标本，父母地中海贫血基因分别为：βCD17/βN和中国型 Gγ+(Aγδβ)0/βN。该胎儿地中海贫血基因型属于β0/β0，在胎儿期完全不能产生Hb A。
此外，一例胎儿脐带血血红蛋白电泳结果显示，Hb A高达37.5%，并检测出含有0.9%Hb A2（α2δ2）。从血红蛋白组分分析，该标本呈现了部分成人阶段血红蛋白的特点，疑似母血污染。由于在胎儿脐带血手术取材中容易发生母血污染，为了保证产前诊断的准确性，采取母血污染鉴定来避免误诊是必要的［5］。除了复合荧光标记短串联重复序列排除母体细胞污染的分子遗传学方法［6-7］，对于胎儿脐带血标本来说，血红蛋白电泳也可以作为母血污染鉴定的一种方法。而且血红蛋白电泳比前者具有易于推广、不受实验室条件限制等优点。
综上所述，产前诊断是降低重型地中海贫血儿出生的有效手段。目前主要是采取孕早期穿刺绒毛，孕中晚期抽取羊水或脐血进一步做β-地中海贫血基因诊断。基因诊断虽然准确性较高，但对实验条件要求高，价格比较昂贵，不能在基层医院普及开展。由于血红蛋白电泳具有价格低、易推广的特点，脐血Hb A值不失作为辅助诊断胎儿β-地中海贫血及母血污染鉴定的一种好方法。
［1］LI TK, LEUNG KY, LAM YH, et al. Haemoglobin level, proportion of haemoglobin Bart’s and haemoglobin Portland in fetuses affected by homozygous α0-thalassemia from 12 to 40 weeks’ gestation［J］.Prenat Diagn,2010, 30(12-13):1126-1130.
［2］TANG HS, ZHOU JY, XIE XM, et al. Screening for common nondeletional α-thalassemias in Chinese newborns by determination of Hb Bart’s using the Sebia Capillarys 2 electrophoresis system［J］.Hemoglobin, 2012, 36(2):196-199.
［3］ENVER T, EBENS AJ, FORRESTER WC, et al. The human beta-globin locus activation region alters the developmental fate of a human fetal globin gene in transgenic mice［J］.Proc Natl Acad sci USA, 1989,86(18):7033-7037.
［4］FUCHAROEN S, PANYASAI S, SURAPOT S, et al. Compound heterozygote state for GgammaAgamma(deltabeta) degrees -thalassemia and hereditary persistence of fetal hemoglobin［J］. Am J Hematol, 2005, 80(2):119-123.
［5］SCHRIJVER I, CHERNY SC, ZEHNDER JL. Testing for maternal cell contamination in prenatal samples: a comprehensive survey of current diagnostic practices in 35 molecular diagnostic laboratories［J］.J Mol Diagn, 2007, 9(3):394-400.
［6］尹爱华,张畅斌,梁驹卿,等.应用复合荧光标记STR-PCR排除绒毛取材中母体细胞污染［J］.中山大学学报:医学科学版,2007, 28(35):203-205.
［7］STOJILKOVIC-MIKIC T, MANN K, DOCHERTY Z, et al. Maternal cell contamination of prenatal samples assessed by QF-PCR genotyping［J］.Prenat Diagn, 2005, 25(1):79-83.