钱 军１，廖凤仙２，陈国德１，骆焱平２
（１．海南省林业科学研究所，海口 ５７１１００；２．海南大学环境与植物保护学院，海口 ５７０２２８）
摘要：测定了海南鹿角藤（Ｃｈｏｎｅｍｏｒｐｈａ ｓｐｌｅｎｄｅｎｓ Ｃｈｕｎ ｅｔ Ｔｓｉａｎｇ）的甲醇粗提物及其石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇4种溶剂萃取物对莴苣指管蚜（Ｕｒｏｌｅｕｃｏｎ ｆｏｒｍｏｓａｎｕｍ Ｔａｋａｈａｓｈｉ）和斜纹夜蛾（Ｐｒｏｄｅｎｉａ ｌｉｔｕｒａ Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ）的杀虫活性。结果表明，鹿角藤的氯仿萃取物对2种害虫具有较好的杀虫活性。莴苣指管蚜随着提取物浓度的增大和处理时间的延长，其死亡率增高。质量浓度为１０ ｍｇ／ｍＬ时，对莴苣指管蚜处理７２ ｈ的死亡率达到８６．９２％，ＬＣ５０为０．７２２ ３ ｍｇ／ｍＬ；斜纹夜蛾四龄幼虫处理２４ ｈ的非选择性拒食率为６９．８４％。
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关键词 ：海南鹿角藤（Ｃｈｏｎｅｍｏｒｐｈａ ｓｐｌｅｎｄｅｎｓ Ｃｈｕｎ ｅｔ Ｔｓｉａｎｇ）；莴苣指管蚜（Ｕｒｏｌｅｕｃｏｎ ｆｏｒｍｏｓａｎｕｍ Ｔａｋａｈａｓｈｉ）；斜纹夜蛾（Ｐｒｏｄｅｎｉａ ｌｉｔｕｒａ Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ）；杀虫活性
中图分类号：Ｓ４３５ 文献标识码：A 文章编号：0439－８114（２０15）16－3936-03
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.16.026
收稿日期：２０１４－１１－１５
基金项目：海南省应用技术研发与示范推广专项（ＺＤＸＭ２０１４０２４）
作者简介：钱 军（１９７９－），男，海南海口人，林业工程师，主要从事有害生物生态调控研究，（电话）０８９８－３６３９６７６０（电子信箱）２３３２７３２０＠ｑｑ．ｃｏｍ；
通信作者，骆焱平，教授，主要从事生物农药研究，（电子信箱）Ｙａｎｐｌｕｏ＠１２６．ｃｏｍ。
随着人类生活水平的提高，人们对高效、低毒、环境友好的化学农药或生物农药的需求增加［１，２］。害虫抗药性问题导致农药的使用周期和使用年限不断缩短，因而，寻求更加高效的农药品种成为科研人员面临的一大难题。植物源农药来源于自然界，同时也是绿色农药先导化合物的理想挖掘材料，受到各国科研工作者的极大关注［３］。海南省具有丰富的热带植物资源，是南药植物的天然宝库，开展其研究具有深远的意义。
海南鹿角藤（Ｃｈｏｎｅｍｏｒｐｈａ ｓｐｌｅｎｄｅｎｓ Ｃｈｕｎ ｅｔ Ｔｓｉａｎｇ）为夹竹桃科（Ａｐｏｃｙｎａｃｅａｅ）鹿角藤属（Ｃｈｏｎｅｍｏｒｐｈａ Ｇ． Ｄｏｎ）多年生藤本植物［４］。该属植物具有重要的药理活性，如《本草纲目拾遗》中用鹿角藤的老茎来治疗妇女黄疸病；漾濞鹿角藤的茎可治疗风湿骨痛、骨折筋伤、外伤出血等症［５］。Ｃｈａｔｔｅｒｊｅｅ等［６］发现鹿角藤碱对感染寄生虫的黄金鼠防效达１００％，对肠道感染寄生虫的幼鼠防效为９０％；２００５年Ｒｏｙ等［７］报道了大叶鹿角藤作为骨骼肌松弛剂的研究机理；２００９年Ｓｈｅｎｄｅ等［８］发现大叶鹿角藤根乙醇提取物对高血糖大白鼠具有降血糖的作用。农用活性表明，鹿角藤粗提物具有较好的杀虫活性。２００５年刘红芳等［９］发现密脉崖鹿角藤叶的乙醇提取物对斜纹夜蛾四龄幼虫有较高的拒食活性。以上对鹿角藤属部分种进行了活性报道，但是关于海南鹿角藤鲜有研究，且作为南药和黎药的独特省份，海南岛孕育了大量的药用植物。为了进一步了解海南鹿角藤的农用活性，本研究对海南鹿角藤进行了研究，期望为该属植物的开发与应用奠定基础。
１ 材料与方法
１．１ 材料
１．１．１ 供试药剂 ０．３６％苦参碱水剂（陕西汇能达生物科技有限公司），０．７％印楝素悬浮剂（鹤壁陶英陶生物科技有限公司）。
１．１．２ 供试昆虫 莴苣指管蚜（Ｕｒｏｌｅｕｃｏｎ ｆｏｒｍｏｓａｎｕｍ Ｔａｋａｈａｓｈｉ）采自海南大学环境与植物保护学院基地的莴苣叶片上；斜纹夜蛾（Ｐｒｏｄｅｎｉａ ｌｉｔｕｒａ Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ）试虫为海南大学农药学实验室饲养，其卵块采自海南大学农业科研基地蓖麻上，在保湿培养皿内孵化成幼虫后，转入养虫盒中，用新鲜干净的蓖麻叶饲养幼虫。试验时选取健康活跃、虫体大小等生理条件一致的四龄幼虫为供试昆虫。
１．２ 方法
１．２．１ 供试药剂的制备 海南鹿角藤采自海南大学儋州校区周边。采用渗漉法［１０］将采集的鹿角藤洗净，阴干，粉碎，过４０目筛，称重后加入干粉５倍体积的甲醇，避光浸提３ ｄ，反复浸提３次。合并浸提液，４５ ℃减压浓缩成膏状物为甲醇粗提物。随后依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇溶剂对甲醇粗提物进行萃取，４５ ℃减压浓缩各萃取液获得鹿角藤４种萃取物，置于４ ℃冰箱保存备用。
１．２．２ 对莴苣指管蚜的触杀活性测定 采用浸渍法测定海南鹿角藤甲醇提取物和４种萃取物对莴苣指管蚜的触杀活性［１１］，用含适量丙酮和０．５％吐温－８０的去离子水将提取物和萃取物配制成质量浓度为１０ ｍｇ／ｍＬ的药液，将含有２５头莴苣指管蚜的莴苣叶片浸没到配制好的药液中，５ ｓ后取出，用吸水纸吸去多余药液，移入干净培养皿中室温保湿饲养。以含等量的丙酮和０．５％吐温－８０的去离子水作溶剂对照，以０．３６％苦参碱水剂１ ０００倍稀释液作药液对照，每处理重复３次。分别处理１２、２４、４８、７２ ｈ后，观察试虫死亡情况，计算死亡率。
１．２．３ 对斜纹夜蛾的拒食活性测定 采用叶碟法测定海南鹿角藤提取物对斜纹夜蛾四龄幼虫的拒食活性［１１］：用含适量丙酮和０．５％吐温－８０的去离子水将提取物配制成质量浓度为１０ ｍｇ／ｍＬ的溶液，用打孔器将新鲜洁净的蓖麻叶片打成直径为２ ｃｍ的叶碟，将叶碟置于药液中浸渍５ ｓ，取出晾干，备用。以含等量的丙酮和０．５％吐温－８０的去离子水作溶剂对照，以０．７％印楝素悬浮剂１ ０００倍稀释液为药剂对照。
选择性拒食测定：选取２片处理叶碟和２片对照叶碟交错地放置于直径为９ ｃｍ培养皿内。
非选择性拒食测定：选取４片相同处理叶蝶十字交叉置于培养皿内，将对照叶碟置于另一培养皿内。
将１头经饥饿处理４ ｈ的斜纹夜蛾四龄幼虫移入上述培养皿内，皿内放置小团吸水的脱脂棉保湿，每处理２０头虫，重复３次。于２４ ｈ后统计试虫取食面积，计算拒食率。
１．２．４ 氯仿萃取物对莴苣指管蚜的毒力测定 用丙酮将氯仿萃取物配制成质量浓度分别为１０、５、２．５、１．２５、０．６２５ ｍｇ／ｍＬ的药液，参照“１．２．２”的方法，测定不同浓度下提取物对莴苣指管蚜的死亡率，绘制毒力回归曲线，求得毒力回归方程。
１．２．５ 数据处理
死亡率＝（死亡虫数／试虫数）×１００％；
校正死亡率＝［（药剂处理死亡率－对照组死亡率）／（１００－对照组死亡率）］×１００％
选择性拒食率＝［（对照组取食叶面积－处理组取食叶面积）／对照组取食叶面积］×１００％
非选择性拒食率＝［（对照组取食叶面积－处理组取食叶面积）／（对照组取食叶面积＋处理组取食叶面积）］×１００％
用ＳＡＳ软件对不同处理间的结果进行差异显著性分析，用Ｅｘｃｅｌ软件对毒力测定结果进行分析，求得毒力回归方程和相关系数，根据回归方程求得ＬＣ５０。
２ 结果与分析
２．１ 粗提物对莴苣指管蚜触杀活性的测定结果
在１０ ｍｇ／ｍＬ浓度下，采用浸渍法测定了海南鹿角藤粗提物对莴苣指管蚜的触杀活性，结果见表１。由表１可知，海南鹿角藤甲醇提取物和４种萃取物对莴苣指管蚜均有一定的触杀活性，且随着处理时间的延长，莴苣指管蚜的死亡率呈上升趋势。试虫受药１２ ｈ后，氯仿萃取物的校正死亡率最好，为６９．３３％；受药２４ ｈ后，氯仿萃取物和石油醚萃取物的触杀活性较好，校正死亡率超过７０％；受药４８ ｈ后，氯仿萃取物和石油醚萃取物的触杀活性较好，校正死亡率超过８０％；统计分析结果表明，氯仿萃取物的校正死亡率与０．３６％苦参碱水剂的活性差异不显著。比较处理时间发现，药剂作用后，害虫死亡率逐渐增加。表明该植物提取物具有较好的持效期，随着时间的延长，活性逐渐体现出来。不同溶剂萃取物活性不一样，总的情况是，氯仿萃取物对莴苣指管蚜的活性最好，其次是石油醚萃取物。
２．２ 粗提物对斜纹夜蛾拒食活性的测定结果
采用叶碟法测定了鹿角藤粗提物对四龄斜纹夜蛾幼虫的选择性拒食活性和非选择性拒食活性，结果见表２。由表２可知，海南鹿角藤５种提取物对四龄斜纹夜蛾幼虫取食行为表现出不同的拒食作用。在非选择性拒食试验中，２４ ｈ后氯仿萃取物的拒食效果最好，拒食率达６９．８４％，甲醇提取物次之，拒食率为６４．７２％，说明四龄斜纹夜蛾幼虫对这2种提取物表现出较敏感的取食反应。在选择性拒食试验中，２４ ｈ后氯仿萃取物和甲醇提取物的拒食作用比较强，其拒食率分别为７８．１３％、７５．８８％；各提取物的选择性拒食率比非选择性拒食的拒食率高，表明海南鹿角藤提取物对四龄斜纹夜蛾幼虫的选择性拒食活性比非选择性拒食活性好。与０．７％印楝素悬浮剂比较，发现各提取物的拒食活性不如对照药剂。
２．３ 氯仿萃取物对莴苣指管蚜的毒力测定结果
由表１和表２可知，海南鹿角藤提取物对供试昆虫的活性测定中，氯仿萃取物的活性最强。对氯仿萃取物作进一步研究，测定该萃取物在不同浓度下对莴苣指管蚜的毒力，结果见表３。由表３可以看出，所获得毒力方程相关系数均大于０．９，说明方程数据的相关性好。ＬＣ５０比较发现，不同观察时间供试药剂对莴苣指管蚜的致死中浓度不同，随着测试时间的延长，ＬＣ５０呈下降趋势，其中７２ ｈ后，对莴苣指管蚜的ＬＣ５０为０．７２２ ３ ｍｇ／ｍＬ，进一步证实了海南鹿角藤提取物的持效性。
３ 小结与讨论
莴苣指管蚜和斜纹夜蛾分别属半翅目蚜科和鳞翅目夜蛾科昆虫，食性杂，寄主种类多，分布广，特别是斜纹夜蛾的幼虫危害猖獗，可为害９９科２００多种植物［１２］。本研究结果表明，海南鹿角藤提取物对莴苣指管蚜和四龄斜纹夜蛾幼虫均具有较好的杀虫活性；各提取物对莴苣指管蚜的触杀活性存在一定的浓度效应和时间效应，随浓度的增加和时间的延长，试虫的死亡率呈较明显的增大趋势；氯仿萃取物杀虫活性最明显，莴苣指管蚜受药７２ ｈ后，校正死亡率达８６．９２％，ＬＣ５０为０．７２２ ３ ｍｇ／ｍＬ，四龄斜纹夜蛾受药２４ ｈ后，非选择性拒食率为６９．８４％，选择性拒食率为７８．１３％，表明海南鹿角藤有望成为开发植物源农药的新资源。
研究发现，不同溶剂萃取物的杀虫活性不同，其中氯仿萃取物的活性稍好，可能是活性物质主要集中在氯仿中。在对莴苣指管蚜的触杀活性测试中，力度大小也影响试验结果，为此，本试验尽量不损坏测试对象，用毛笔轻轻触摸。叶碟法测试拒食活性时，为了减少叶片的干枯萎缩，试验中用滤纸和脱脂棉保湿。本试验暂时不能确定其杀虫活性的主要物质，在今后的研究中将对海南鹿角藤杀虫活性成分作进一步分离，明确具体活性物质的种类，并对其杀虫作用机制进行初步探讨。
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